Выявление Х-хроматина и Y-хроматина в цитологических препаратах.
Вырезки, либо соскобы, смывы с поверхности вещественных доказательств помещают в пробирки, которые используются для реакции Чистовича-Уленгута, либо в центрифужные пробирки при большом количестве исследуемого материала.
Пробирки заливают 25% раствором уксусной кислоты и закрывают ватными пробками. Экстрагируют в течение 18-24 часов в при комнатной температуре.
Затем кусочки материала, подвергшиеся экстракции, удаляют, тщательно отжимая из них остатки раствора уксусной кислоты в пробирки. Этот материал в дальнейшем используется для установления групповой принадлежности биологических объектов.
Пробирки подвергают центрифугированию в течение 5-10 минут при 1500-2000 об/мин. Затем надосадочную жидкость удаляют путем сливания либо отсасывания из пробирок. Если в экстракте содержится много гемоглобиновых производных, то следует еще один или несколько раз залить исследуемый осадок 25%-м раствором уксусной кислоты и подвергнуть центрифугированию вышеуказанным способом до полного просветления надосадочной жидкости.
Осадок тщательно ресуспензируется и наносится в виде 2 капель на предварительно подписанные стандартные предметные стекла со шлифами, обезжиренными в смеси Никифорова. Мазки высушивают при комнатной температуре и фиксируют в течение 15 минут этанолом (лучше погружать стекла в 96%-й этиловый спирт). Затем высушивают и окрашивают на У-хроматин производными акрихина.
Готовые препараты подвергают микроскопии на флуоресцентном микроскопе. При микроскопии выявляют У-хроматин как в клетках крови, так и других тканей.
В лейкоцитах можно в люминесцентном режиме достаточно легко выявить и X-хроматин (полоспецифические отростки типа А и В).
Для выявления Х-хроматина в клетках других тканей (телец Барра) и органов надо обесцветить мазки в течение 15 минут этанолом (процедура, аналогичная фиксации). Затем стекла высушивают и опускают на 20 минут в 5-нормальный раствор соляной кислоты, после чего промывают проточной водой в течение 2 минут. Затем, после подсушивания, препараты окрашивают 0,1% раствором азур-эозиновой смеси в течение 15-20 минут. После окраски смесь, удаляют проточной водой. Микроскопию осуществляют в световом режиме. При этом выявляют Х-хроматин в виде телец Барра, но полоспецифические отростки в клетках крови также успешно выявляются, особенно в сомнительных случаях.
