Микроскопическое исследование секрета молочной железы при судебно-медицинской экспертизе бывших родов.
Микроскопическое исследование секрета молочной железы производится для изучения его морфологического состава.
Делаются мазки на стандартных предметных стеклах. Фиксация 15 минут этанолом. Окраска мазков, производится 0,1% раствором азур-эозиновой смеси.
В окрашенных мазках выявляется морфологический состав секрета молочной железы, состоящий после родов из жировых шариков и десквамированных эпителиальных клеток, которые подразделяются на малые и большие. Эти клетки отсутствуют в зрелом молоке кормящих женщин, состоящем из плазмы и жировых шариков.
Жировые шарики по размерам разделяются на малые (диаметром 1-3 мкм), средние (диаметром 4-7 мкм) и большие (диаметром 8-10 мкм). Они обнаруживаются в секрете постоянно, а в зрелом молоке являются единственными морфологическими элементами.
Малые эпителиальные клетки (протоковые) круглой формы, размерами 10-20 мкм в диаметре, с овоидным ядром розоватого цвета. Цитоплазма базофильная, может содержать мелкие жировые включения, которые имеют вид пустот. Они располагаются одиночно и группами на протяжении всего срока беременности и после родов, у не кормящих женщин в течение 1-1,5 месяцев являются преобладающей клеточной формой.
Средние эпителиальные клетки (альвеолярные) круглой формы размерами 21-50 мкм в диаметре. Они имеют как правило однородную структуру. Цитоплазма их содержит одинакового размера включения жира (пустоты). Ядро расположено эксцентрично, фиолетового цвета с розоватым оттенком. Данные клетки являются постоянными морфологическими элементами секрета молока. Количество их увеличивается в первые 3 месяца беременности, а с 4-го уменьшается,. После родов у не кормящих женщин их бывает небольшое количество, а с 2-х -3-х месяцев и до окончания секреции молочной железы средние эпителиальные клетки являются единственными из эпителиоцитов.
Большее эпителиальные клетки - это многоядерные образования (симпласты), имеющие от 2-4 до 30-40 ядер размерами 51-120 мкм в диаметре. Эти клетки появляются из комплексов десквамированных малых эпителиальных клеток в конце беременности (срок 6-9 месяцев). Они обнаруживаются в отдельных полях зрения. После родов в мазках обнаруживаются отдельные их части (ядра, цитоплазма).
Нейтрофильные лейкоциты появляются в секрете молочной железы небольшом количестве при беременности сроком 18-20 недель и значительно увеличиваются в момент родов и на 3-4 день после родов, а также при восполительных процессах в молочной железе.
Молозиво выделяется до 3-х дней после родов и содержит большое количество клеток. Переходное молоко выделяется с 4-го до 7-го дня. В нем уменьшается количество клеток. Зрелое молоко - с 8-го до 10-го дня не содержит клеточных элементов. В нем имеются только жировые шарики. Если же женщина не кормит ребенка, то секрет ее молочной железы имеет вид молозива! В первые 1-1,5 месяца после родов в нем преобладают малые эпителиальные клетки (до 80%), а также встречаются средние эпителиальные клетки (до 20%). С 2-3 месяцев после родов количество средних эпителиальных клеток увеличивается до 60%, а. количество малых эпителиальных клеток снижается до 40%. С 3-4 месяцев после родов единственными клетками в секрете остаются только средние эпителиоциты. При этом количество секрета и клеток постепенно уменьшается.
Морфологические элементы располагаются обычно по краям и в конце мазка. В каждом случае необходимо просматривать не менее 2-3 мазков. Морфологические элементы просчитывают в 10 полях зрения при увеличении объектива 10х и 40х и определяют среднее их количество. Надо подсчитывать не только общее количество клеток, но и их количество по видам (лейкоциты, малые, большие, средние эпителиоциты) для определения количественного соотношения клеток в мазке. Кроме того учитывают расположение клеток, степень выраженности структуры цитоплазмы и ядра, окрашиваемость их и морфологические особенности: включения жира, остатки клеток после разрушения и т.п.
Цитология секрета молочной железы в разные сроки беременности
Беременность 4-11 недель. Секрет содержит жировые шарики пылевидные, малые, средние и в отдельных случаях большие в незначительном количестве. Они располагаются отдельно преимущественно по краям и в конце мазка. Средние эпителиальные клетки с однородной мелко пенистой цитоплазмой (в поле зрения до 30, чаще 3-10), на фоне плазмы фиолетово-розового цвета они представляются светлыми, почти не варьируют по своим морфологическим признакам.
Беременность 12-26 недель. Морфологический состав резко отличается от предыдущего. Клеток в нем умеренное количество. В секрете несколько увеличивается количество жировых шариков. Появляются мелкие эпителиальные клетки, располагающиеся изолированно и небольшими скоплениями, количество их постепенно увеличивается. Цитоплазма клеток базофильная, а к 20 неделям беременности в некоторых из них появляются мелкие включения жира, затем они обнаруживаются чаще. В секрете появляются и комплексы малых эпителиальных клеток в виде синцития с неровными контурами. Среднего размера эпителиальных клеток мало, цитоплазма их становится неравномерно пенистой, вследствие включений жира различного размера. Количество этих клеток постепенно уменьшается (1-5 в поле зрения). Встречаются отдельные из них с базофильной цитоплазмой или с несколькими ядрами (2-3). Нейтрофильные лейкоциты появляются в секрете с 16-19 недели беременности в небольшом количестве (1-10 в отдельных полях зрения), с 20-26 недели в некоторых из них цитоплазма содержит мелкие вакуоли. В этот срок (16-19 недель) встречаются в отдельных случаях большие эпителиальные клетки.
Беременность 27-40 недель. Клеток в секрете много, они располагаются по всему мазку, особенно по краям и в конце его, Основной массой клеточного состава являются также малые эпителиальные клетки, которые часто встречаются большими скоплениями круглой и неправильной овальной формы. Цитоплазма их неравномерно пенистая, базофильная. Среднего размера эпителиальных клеток мало, цитоплазма их базофильная часто с включениями жира различного размера. Встречаются единичные большие многоядерные эпителиальные клетки (симпласты) размером 60-120 мкм с большим количеством ядер (20-40). Нейтрофильные лейкоциты с неравномерно пенистой и базофильной цитоплазмой, так называемые перстневидные клетки, разрушающиеся и представленные в виде свободных ядер, остатков ядра и цитоплазмы, кристаллов встречаются в небольшом количестве. Миоэпителиальные клетки, гистиоциты и лимфоциты встречаются редко, В этот срок беременности наблюдается базофилия всех клеток.
Морфологический состав молока кормящих женщин.
Наибольшей активности в секреторной деятельности молочные железы достигают после родов в период лактации. Так, микроскопическое исследование (каждый час) молозива кормящих женщин в первые сутки после родов показало изменение его морфологического состава, особенно через 8-12 часов. Это значительное увеличение жировых шариков, уменьшение количества эпителиальных клеток, лейкоцитов и увеличение распадающихся клеток.
После кесарева сечения молозиво отличается значительно большим количеством лейкоцитов. В первые 3-7 дней после родов молозиво содержит помимо жировых шариков небольшое количество малых и средних эпителиальных клеток, лейкоциты и разрушенные клетки. В норме оно переходит к зрелому молоку на 7-10 день после родов.
В дальнейшем на протяжении 8-10 месяцев кормления грудью ребенка в плазме секрета имеются только жировые шарики. К 10-12 месяцу грудного вскармливания ребенка в связи с начинающейся инволюцией молочной железы после уменьшения числа кормлений появляются в небольшом количестве средние эпителиальные клетки с мелко пенистой цитоплазмой.
Морфологический состав секрета у рожениц, не кормивших детей, значительно отличается от нормы. В нем содержатся жировые шарики с большим количеством эпителиальных клеток, с преобладанием эпителиоцитов среднего размера, которых в течение 3-10 месяцев становится все меньше и меньше. После прекращения грудного вскармливания ребенка молочная железа подвергается обратному развитию. Количество секрета и форменных элементов постепенно уменьшается в зависимости от степени выраженности и продолжительности лактации, возраста ребенка, здоровья матери и др.
