Исследование эпителиальной ткани.
Различают многослойный плоский неороговевающий эпителий, который выстилает роговицу глаза, слизистую оболочку рта (кроме неба), пищевод, слизистую влагалища, конечного отдела уретры, небольшой участок прямой кишки (промежуточная зона у самого сфинктера размерами около 1,5 см). В нем различают базальный слой, который лежит на базальной мембране, парабазальный, промежуточный и поверхностный слои. Постоянно происходит десквамация эпителия. При проведении экспертиз вещественных доказательств в препаратах чаще всего встречаются два верхних слоя многослойного плоского неороговевающего эпителия.
Буккальный эпителий выстилает слизистую оболочку рта. Клетки его содержат мало гликогена (около 5%) и имеют вид тонких пластинок и полигональную либо овальную форму. Размеры клеток от 48 до 142 мкм. В среднем приблизительно 89 мкм. Площадь клеток от 2000 до 7500 мкм2. Ядро в клетках поверхностного слоя пикнотеческое. Его размеры от 8 до 15 мкм, а площадь 28-90 мкм2. Ядерноцитоплазматический индекс 1/7-1/9. Ядро имеет круглую либо овоидную форму и располагается, как правило, эксцентрично. Край клеток ровный не завернутый. В цитологических препаратах целость почти всех клеток не нарушена. Цитоплазма клеток прокрашивается разномерно и неярко. Начиная с увеличения 40х, видно, что цитоплазма имеет мелкие полоски (исчерченность). При окраске амидочерным клетки буккального эпителия имеют характерный признак - белковые включения, которые прокрашиваются в темно-синий цвет.
Вагинальный эпителий выстилает слизистую оболочку влагалища. У женщин репродуктивного возраста имеет ярко выраженный полиморфизм, то есть в цитологических. препаратах присутствуют клетки всех слоев эпителия: как поверхностного и промежуточного, так базального и парабазального. Причем клеток промежуточного и поверхностного слоя значительно больше, так как эти слои развиты лучше. У женщин в период менопаузы и у девочек, не достигших половой зрелости, в цитологических препаратах представлены в основном клетки базального и парабазального слоя, так как поверхностный и промежуточный слой эпителия у них не развит. Размеры эпителиоцитов колеблются от 40 до 101 мкм. Средний размер приблизительно 68 мкм. Площадь клеток от 900 до 4100 мкм². Клетки вагинального эпителия меньше, чем клетки буккального эпителия. Размер ядер от 5 до 10 мкм (в среднем приблизительно 7 мкм). Площадь ядер около 34мкм² .Ядерно-цитоплазматический индекс 1/7-1/10, Форма клеток в основном полигональная. Ядра чаще всего круглые и располагаются центрально. Края клеток обычно мелкозубчатые, завёрнутые, складчатые. В препаратах встречается много поврежденных клеток. Прокрашиваются клетки неравномерно. При окраске амидочерным белковые включения в цитоплазме клеток отсутствуют, но у некоторых клеток вокруг ядра встречается зона просветления (нимба). Характерным дифференцирующим признаком вагинального эпителия является содержание в нем большого количества гликогена (в 50-60% клеток). Признаком, помогающим определить вагинальные клетки, является наличие в них характерных бактерий - вагинальных палочек (или палочек Дадерлейна). Это довольно крупная подвижная бактерия обнаруживается чаще всего в гликогенсодержащих клетках промежуточного слоя. Ко 2-ой половине менструального цикла, когда развивается поверхностный слой, вагинальная палочка исчезает и на десквамированных клетках обнаруживается полиморфная микрофлора.
Уретральный эпителий похож на вагинальный, но отличается от него низким содержанием гликогена (гликоген почти полностью отсутствует), а также меньшими размерами и формой эпителиоцитов, края которых, не завернуты. При окраске амидочерным в цитоплазме выявляются белковые включения, но их значительно меньше, чем в клетках буккального эпителия.
Ректальный эпителий может быть дифференцирован только по наличию в препаратах клеток многослойного кубического эпителия, которым выстлана прямая кишка в столбчатой зоне. От сигмовидного конца до ампулы прямая кишка выстлана однослойным призматическим эпителием. В промежуточной зоне есть многослойный плоский неороговевающий эпителий, а у ануса эпидермис. Клетки многослойного кубического эпителия имеют ярко выраженную полигональную форму. Края клеток ровные, а углы вытянуты. Ядро имеет овоидную форму и располагается центрально. При окраске азур-эозиновой смесью клетки приобретают сине-фиолетовый цвет. В цитоплазме имеются мелкие и расплывчатые включения. Размеры эпителиоцитов от 18 до 40 мкм (в среднем около 28 мкм). Ядра имеют размер от 7 до 12 мкм (в среднем 9-9,5 мкм). Ядерно-цитоплазматический индекс 1/3.
Мезотелий (однослойный плоский эпителий) выстилает грудную, брюшную полости, а также эндокард. В препаратах смывов и отпечатков целомических полостей обнаруживаются обычно единичные мезотелиапьные клетки. Типичными являются большие клетки диаметром 70 мкм, имеющие вид полигональных пластин с ядром овальной либо круглой формы диаметром 10-12 мкм. Ядра с хорошо различимой хроматиноврй субстанцией прокрашиваются интенсивно и располагаются как правило центрально. При окраске азур-эозином цитоплазма клеток светлая, сероватая, в некоторых клетках с обильными мелкими и крупными включениями интенсивного серо-голубого цвета, создающими впечатление сетчатости, наиболее выраженной вокруг ядра. Помимо крупных клеток иногда встречаются мезотедиальные клетки малых размеров (18-20 мкм), а также ядра с обрывками цитоплазмы. Эти клетки достаточно часто встречаются на орудиях травмы. Найдя их, эксперт-цитолог обязательно должен в выводах указать на то, чго обнаружение мезотелиальных клеток подтверждает тот факт, что ранение, нанесенное потерпевшему, было проникающим.
Кожа состоит из многослойного плоского ороговевающего эпителия. При разрезе кожи и изготовлении препаратов смывов и отпечатков в них обычно можно наблюдать следующую картину: основную массу составляют роговые чешуйки, а клетки шиповатого, базального и зернистого слоев обнаруживаются реже. Во многих роговых чешуйках на месте ядра имеются просветления цитоплазмы. Обычно это клетки из нижних отделов рогового слоя. Клетки зернистого слоя имеют полигональную форму и размеры 25-40 мкм. Цитоплазма их при окраске азур-эозином бывает либо гомогенной, либо зернистой сетчатой бледно-розовой и слегка базофильной. Ядро прозрачное и располагается по периферии клетки. Клетки шиповатого слоя имеют крыловидную форму в основе которой лежит вид кубической клетки., но с контурами неправильной формы и 1-2 отростками. Цитоплазма окрашивается интенсивно особенно на месте отростков. Ядро округлой или неправильно свальной формы окрашивается не резко. В центре его обычно можно различить глыбки хроматика. Клетки базального слоя сохраняют вид цилиндрического эпителия и имеют неправильную конусовидную форму (один конец клетки широкий, а другой узкий). Длина клеток составляет обычно 12- 30 мкм. Ядро крупное овальное нередко базофильное. Цитоплазма розового цвета, причем ее узкая часть окрашивается интенсивно, а широкая - бледно. Степень окраски уменьшается вблизи краев клетки. Встречаются также клетки без суженого участка. Клетки шиповатого и базального слоев часто содержат зерна пигмента преимущественно вокруг ядер и вдоль клеточных границ. В мазках, изготовленных из смывов и отпечатков измельченной кожи, обнаруживаются клетки рогового слоя эпидермиса. Изредка встречаются элементы волосяных луковиц и клетки конечных отделов сальных желез диаметром около 20 мкм с почти неокрашенной цитоплазмой и распадающимся ядром.
Экспертная тактика при дифференцировании клеток многослойного плоского эпителия
При различного рода половых преступлениях необходимо дифференцировать клетки вагинального, буккального и ректального эпителия. Достоверность получаемых результатов во многом зависит от тактики приготовления, окраски и исследования цитологических препаратов.
Вырезки, соскобы либо смывы с поверхности вещественных доказательств помещают в пробирки, которые используются для реакции Чистовича-Уленгута, либо в центрифужные пробирки (при большом количестве исследуемого материала), заливают 10% раствором уксусной кислоты и закрывают пробирки ватными пробками. При исследовании мазков-отпечатков с половых членов проходящих по делу лиц с поверхности всех стекол, присланных на исследование, смывают материал в одну пробирку.
Экстрагируют в течение 3-х часов при комнатной температуре. Затем приготовляют мазки тем же способом, что и для определения половой принадлежности крови. После фиксации в течение 10 минут этанолом мазки окрашивают 0,05% раствором амидочерного в жидкости Карнуа, после чего подвергают микроскопии в световом режиме объектив 40х (лучше водной иммерсии), окуляр 10х.
При этом главная задача эксперта состоит в том, чтобы найти клетки с ядрами. Если их нет, то экспертиза на этом заканчивается и делается вывод о необнаружении клеток. Если клетки с ядрами найдены, то эксперт должен попытаться при данной окраске найти в них характерные дифференцирующие признаки. Это либо белковые включения в цитоплазме (буккальный эпителий), либо феномен нимба вокруг ядра (вагинальный эпителий).
Затем следует избавиться от амидочерного путем промывания стекол в 7% растворе аммиака, после чего препараты окрашивают производными акрихина на У-хроматин и подвергают микроскопии на флуоресцентном микроскопе.
При микроскопии ищут в ядрах У-хроматин, который может встретиться в цитологических препаратах, если в них писутствуют клетки эпителия мужской уретры. Затем препараты высушивают и исследуют клетки на наличие гликогена (добавляют небольшую каплю раствора Люголя и микроскопируют в световом режиме (объектив 40х, окуляр 10х).
При этом гликоген в виде коричневых гранул можно наблюдать в клетках вагинального эпителия. После этого избавляются от раствора Люголя путем погружения стекол на 15 минут в анод и перекрашивают мазки на X-хроматин 0,1% раствором азур-эозиновой смеси, предварительно выдержав их в 5 нормальной соляной кислоте в течение 20 минут и смыв ее проточной водой в течение 2 минут. Затем подвергают препараты микроскопии в световом режиме при тех же параметрах (объектив водной иммерсии 60х (Д=0), окуляр 10х с целью определения половой принадлежности клеток и их морфологии. Затем, в случае необходимости, устанавливают груповую принадлежность клеток.
Существенное значение для цитологического анализа имеют «следообразующие» свойства эпителия, зависящие от прочности соединения клеток в эпителиальных пластах. Самая прочная связь между клетками существует в эпидермисе, поэтому в следах обнаруживаются лишь отпадающие роговые чешуйки. Даже при повреждении эпидермиса в следы могут попасть либо частицы эпидермального пласта, либо отдельные роговые клетки, но не клетки других слоев. Исключением является эпидермис переходного типа, выстилающий преддверие носовой полости и внутреннюю поверхность малых половых губ. Поэтому появление в следах большого количества эпидермальных клеток и групп этих клеток с ядрами наряду с безъядерными клетками должно наводить на мысль о происхождении их из эпидермиса переходного типа. Самыми мощными следообразующими» свойствами обладает вагинальный эпителий. В следы попадают в первую очередь клетки верхних рядов. В результате механического воздействия на вагинальную стенку в содержимое следа могут попасть и клетки базального слоя.
