Ларвоскопическое исследование мышечной ткани для обнаружения личинок трихинелл.
Метод трихинеллоскопии
Материал на исследование: поперечно-полосатая мышечная ткань, кроме мышцы сердца.
Необходимое оборудование
- Стеклянный компрессорий или предметные стекла (размером 12 х 6 или 15x8 см)
- Стереоскопический микроскоп
- Препаровальные иглы
- Термостат
- Ножницы, скальпель
- Измельчитель ткани
- Эмалированные кюветы
- Химические стаканчики
- Чашки Петри
- Пипетки
Компрессорная трихинеллоскопия
Ход исследования
Каждую пробу мышц перед исследованием помещают в чашки Петри, расположенные на эмалированных кюветах, куда помещают и необходимый инструментарий (ножницы, пинцеты, препаровальные иглы), предметные стекла. Работа проводится в перчатках с соблюдением правил техники безопасности.
Из каждой пробы мышц (от одного больного) ножницами делают срезы строго вдоль мышечных волокон, величиной с "овсяное зерно". Всего из разных участков пробы делают 24 среза, а при отрицательных результатах в 3—4 раза больше. Каждый срез помещают на отдельный квадрат нижнего стекла компрессория (всего в компрессории 24 квадрата) и сдавливают верхним стеклом, путем завинчивания закрепляющих винтов компрессория. При отсутствии компрессория срезы помещают на большое предметное стекло, причем на значительном расстоянии друг от друга, чтобы во время сдавливания они не сливались. Накрывают сверху покровным стеклом меньших размеров и сдавливают до толщины папиросной бумаги. Микроскопируют все срезы (каждый срез в отдельности) применяя стереоскопический микроскоп с увеличением: объектив х 2 или х 4, окуляр х 12; х 14; х 14,5. При обнаружении в мышцах хотя бы одной личинки трихинелл все пробы мышц утилизируют, перед этим засыпаются или заливаются дезинфектантами: 10%-ным раствором лизола А, сухой хлорной известью или белильной термостойкой известью, или применяют водяной насыщенный пар под давлением 1,5 кГс/см2 (0,15 МПа) 126 + 2 °С. Инструментарий и лабораторная посуда обезвреживается кипячением в течение 60 мин (с момента закипания), или автоклавируются (при вышеуказанном режиме).
Диагностика личинок трихинелл бывает затруднена, если срезы толстые или кусочки мышц подсохли, или в срезах обильные включения жира, или пробы мышц фиксированы формалином, или личинки находятся в обызвествленных капсулах.
В этих случаях:
• можно поместить срезы мышц в 5 %-ный раствор едкой щелочи и выдержать в течение 1 ч при комнатной температуре или 10 мин в термостате при температуре 45 °С;
• срезы с обызвествленными капсулами, где личинки не видны, помещают предварительно в 5—10 %-ный раствор соляной кислоты на 1—2 ч, чтобы растворить известь, затем помещают в глицерин или молочную кислоту для просветления.
Результат микроскопирования: инкапсулированная личинка трихинелл в мышцах представляет собой капсулу личинки лимоновидной или овальной формы; размеры 0,5— 0,7 х 0,2—0,3 мм; внутри капсулы одна, реже две или три спиралевидно свернутых личинки. При бескапсульном варианте обнаруживаются только спиралевидно свернутые личинки.
Трикинеллоскопиа методом переваривании в искусственном желудочном соке
Реактивы:
• Соляная кислота концентрированная (или 1 %-ная для 2-го варианта прописи)
• Медицинский пепсин кристаллический (или 3 %-ный для 2-го варианта прописи)
• Дистиллированная вода
Подготовка к работе
• Мышечную ткань измельчают до состояния фарша.
о Готовят раствор искусственного желудочного сока по одной из прописей:
1) 1 л дистиллированной воды + 7 мл 1 %-ного раствора соляной кислоты + 5 мл 3 %-
ного раствора пепсина;
2) 1 л дистиллированной воды + 7 мл концентрированной соляной кислоты + 5—7 г
пепсина кристаллического.
Ход исследования
• Количество искусственного желудочного сока на мышечную массу рассчитывается и
расчета: на 10 частей искусственного желудочного сока - 1 часть мышечной массы
(например: на 100 мл желудочного сока - 10 г мышечного фарша).
• В химический стакан с желудочным соком помещают мышечную массу и тщательно
размешивают.
• Помещают в термостат при температуре 37 °С на 16—18 ч, периодически помешивая стеклянной палочкой.
• После переваривания всю массу помещают в аппарат Бермана, на сито из мельничногогаза (№ 26).
• Через 1,5—2 ч все личинки оседают на дно пробирки, пробирку снимают, отсасывают верхний надосадочный слой пипеткой.
• Осадок переносят в чашку Петри или предметные стекла и микроскопируют под стереоскопическим микроскопом, увеличение: объектив х 2 или х 4, окуляр х 1 или х 14.
При использовании 2-го варианта прописи желудочного сока реакция ускоряется ход проведения методики меняется.
• Фарш помещают в пробирку с желудочным соком (в соотношении 1:25 или 1 : 50) и ставят в термостат при температуре 42—47 °С на 3,5 ч
• Личинки осаждают в химическом стаканчике емкостью 50 мл в течение 20—30 мин.
• Надосадочную жидкость сливают.
• Осадок микроскопируют в чашке Петри с использованием стереоскопического микроскопа, увеличение: окуляр х 12, х 14, х 14,5; объектив х 2, х 4.
• Непереваренные мышечные волокна можно окрасить 0,25 %-ным раствором бриллиантового зеленого, в результате хорошо видны недекапсулированные личинки трихинелл.
Эффективность метода
• Метод компрессионной трихинеллоскопии эффективен при высокой и средней интенсивности трихинеллезной инвазии.
• Для повышения эффективности обнаружения личинок трихинелл следует увеличить количество исследуемых мышечных срезов в 3—4 раза, т. е. вместо 24 исследовать 72—96 срезов.
• При низкой интенсивности инвазии более эффективен метод переваривания в искусственном желудочном соке.
Применение метода
• Применяется как метод прямой диагностики для обнаружения личинок трихинелл в мышечной ткани.
