Микроскопическое исследование мазка крови.
Исследование мазка крови позволяет обнаружить различные нарушения структуры эритроцитов (изменение их формы, размеров, появление не вполне зрелых форм эритроцитов и т.д.), что играет большую роль в диагностике различных видов анемий.
Важным для диагностики ряда заболеваний может оказаться подсчет числа тромбоцитов (в норме их количество составляет 180-300x109 в 1 л крови или 180000- 320000 в 1 мкл крови). Уменьшение числа тромбоцитов в ряде случаев является причиной повышенной кровоточивости.
Кровь для клинического анализа берут обычно из IV пальца левой руки после предварительной обработки кожных покровов смесью спирта и эфира. Прокол иглой-скарификатором производят сбоку в мякоть первой фаланги на глубину 2,5-3 мм. Кровь после прокола должна поступать свободно, так как при сильном надавливании на палец с целью улучшения выделения крови к ней примешивается тканевая жидкость, что снижает точность исследования. Первую полученную каплю крови стирают сухой ваткой.
Общий клинический анализ крови включает в себя определение содержания гемоглобина, подсчет количества эритроцитов с последующим вычислением цветового показателя, подсчет общего числа лейкоцитов с оценкой лейкоцитарной формулы, подсчет числа тромбоцитов, определение СОЭ.
Подсчет числа эритроцитов производят в специальных счетных камерах Гаряева под микроскопом. После предварительного разведения крови и определения числа эритроцитов в 5 больших квадратах счетной сетки камеры осуществляют пересчет на содержание их в 1 л. Нормальное содержание эритроцитов в 1 л крови составляет: у женщин 3,9- 4,7х1012, у мужчин - 4-5x1012.
Определение содержания лейкоцитов также проводят в счетной камере после предварительного разведения крови. После подсчета их числа в 100 больших квадратах счетной сетки камеры путем соответствующего пересчета определяют их общее количество в 1 л крови. В норме содержание лейкоцитов в 1 л крови составляет 4,0-9,0x109 (4000-9000 в 1 мкл). Повышение числа лейкоцитов выше указанной нормы носит название лейкоцитоза, снижение - лейкопении.
Лейкоцитарная формула представляет собой процентное соотношение отдельных форм лейкоцитов в крови (палочкоядерных, сегментоядерных, эозинофилов, базофилов, лимфоцитов). Для точной ее оценки после приготовления мазка крови просматривают не менее 200 лейкоцитов. Определение лейкоцитарной формулы имеет большое значение для диагностики многих заболеваний.
В диагностике гематологических заболеваний широко используются оценка осмотической резистентности (устойчивости) эритроцитов, характеризующая их повышенное разрушение (гемолиз), исследование показателей свертывающей системы крови (времени свертывания крови, продолжительности кровотечения, активности различных факторов свертывания крови). Результаты этих исследований позволяют точнее дифференцировать различные формы анемий, гемобластозов, геморрагических диатезов.
Дифференциация клеточных элементов производится в счетной камере. В счетной камере с сухой системой (окуляр 15 X или 10X, объектив 40X) можно дифференцировать почти все клеточные элементы. Реактив окрашивают ядра клеток в Красновато-фиолетовый цвет, цитоплазма остается бесцветной. При этом обращают внимание на величину клеток, форму и расположение ядра, ядерно-цитоплазменное соотношение, наличие включений в цитоплазме и т.д. В практической работе метод используют наиболее часто.
Дифференциация в окрашенных препаратах:
О к р а с к а п о Р о з и н о й. Жидкость центрифугируют 7—10 мин. Надосадок сливают, осадок помещают на обезжиренное стекло, легким покачиванием распределяют его на поверхности стекла, через 1—2 мин жидкость сливают. При небольшом плеоцитозе (менее 50 в 3 мкл) осадок распределяют на участке 1см(степень2) ; при. плеоцитозе, превышающем 100 в 3 мкл,— на участке 1,5—2 см2; при плеоцитозе 500 в 3 мкл — на участке 2—3 см2. При очень большом количестве клеточных элементов и наличии крови, осадок распределяют на всей поверхности предметного стекла и тотчас сливают. Стекло ставят в вертикальное положение. При этом достигается Минимальная толщина мазка. Мазки высушивают в сушильном шкафу при температуре 40—50 °С Затем фиксируют метанолом 1—2 мин и красят по Романовскому: тонкий препарат с небольшим цитозом 6—7 мин, с большим цитозом и кровью 10—12 мин. Затем краску сливают, мазок промывают дистиллированной водой и высушивают. Если ядра имеют бледно-голубой цвет, мазок докрашивают еще 2—3 мин.
О к р а с к а п о В о з н о й. Осадок выливают на стекло; слегка покачивая его, жидкость равномерно распределяют на поверхности. Мазок высушивают при комнатной температуре в течение суток, фиксируют метиловым спиртом 5 мин, покрывают раствором азур-эозина (таким же, как для окраски крови, но разведенным в 5 раз). Красят в течение 1 ч. Если клетки бледны, докрашивают неразведенной краской под контролем микроскопа от 2 до 10 мин. Чем больше форменных элементов в ликворе, особенно при наличии крови, тем больше надо дополнительно красить.
О к р а с к а п о А л е к с е е в у. На высохший, но не фиксированный препарат наносят 6—10 капель красителя Романовского. Той же пипеткой осторожно распределяют краску на весь препарат и оставляют на 30 с. Затем добавляют на препарат (не сливая краски) 12—20 капель дистиллированной воды, предварительно нагретой до температуры. 50—60 °С. Соотношение капель краски и воды должно быть 1:2. Покачиванием препарата перемешивают краску с водой и оставляют на 3 мин. Смывают краску струей дистиллированной воды, сушат препарат фильтровальной бумагой и микроскопируют. Метод пригоден для проведения срочного цитологического исследования.
Морфология клеточных элементов.
Лимфоциты по величине сходны с эритроцитами. При дифференцировании клеток в камере лимфоциты, окрашенные фуксином, имеют круглое ядро и узкий неокрашенный ободок цитоплазмы, иногда только с одной стороны. Лимфоциты в небольшом количестве (8—10 в 3 мкл) встречаются в нормальной жидкости. Количество их нередко увеличивается при опухолях ЦНС. Значительный и резкий лимфоидный плеоцитоз наблюдают при хронических воспалительных процессах в оболочках (туберкулезный менингит, цистицеркозный арахноидит и др.), в послеоперационном периоде (спустя несколько дней после операции вслед за нейтрофильным плеоцитозом) и пр.
Плазматические клетки. Фуксин хорошо окрашивает ядро и цитоплазму, клетки крупнее лимфоцита, ядро круглое, эксцентрично расположенное, большое количество цитоплазмы при сравнительно небольшом размере ядра (размер клеток 6—12 мкм). Плазматические клетки обнаруживаются только в патологических случаях: при длительно текущих воспалительных процессах в мозге и оболочках (энцефалит, туберкулезный менингит, цистицеркозный арахноидит), в послеоперационном периоде при вяло текущем заживлении раны.
Тканевые моноциты. Размер клеток от 7 до 10 мкм. В нормальной жидкости иногда могут встречаться в виде единичных экземпляров. В большом количестве обнаруживаются после оперативного вмешательства на ЦНС, при длительно текущих воспалительных процессах в оболочках (туберкулезный менингит, цистицеркоз) и др. Наличие тканевых моноцитов в послеоперационном периоде говорит об активной тканевой реакции и нормальном заживлении раны.