Выбор панели иммуногистохимических маркеров для дифференциальной диагностики.
Выбор панели специфических антител определяется целями и задачами исследований конкретной лаборатории.
Основная панель иммуногистохимических маркеров для дифференциальной диагностики неоплазий.
1. Лимфомы – Leucocyte Common Antigen
- Т-клеточный фенотип опухоли – CD3, CD4, CD8, CD2, CD7
- B-клеточный фенотип опухоли – CD20, CD79a, CD22, CD21
- Лимфома Ходжкина – СD15, CD30
2. Меланомы – S100, Melan A, Tyrosinase
3. Герминогенные опухоли – PLAP Alpha, Fetoprotein, HCG
4. Карциномы – Cytokeratins, EMA, Prealbumin
- Опухоли молочной железы – Estrogen, Progesteron, Her-2/new
- Опухоли простаты – PSA, Prostatic Acid Phosphatase
- Эндокринные опухоли – Thyroglobulin, Calcitonin
- Мезотелиомы – Epithelial Specific Antigen
- Нейроэндокринные опухоли – Chromogranin, Synaptophysin, NSE
5. Саркомы – Vimentin
- Опухоли мышечной ткани – Desmin, Smooth Muscle Actin
- Опухоли сосудистого генеза – Endothelial Cell Marker, von Willebrand factor
- Опухоли оболочек периферических нервов – S100
6. Синецеллюлярные опухоли – Neuroblastoma, MyoD1, Myf 4, Myoglobin, CD99
7. Нейроглиальные опухоли – GFAP, NSE, Neurofilaments, PGP9.5
- Маркеры клеточной пролиферации – PCNA, Ki-67
- Маркеры вирусных заболеваний – гепатит В и С, Helicobacter pylori, Papilloma virus
Моноклональные антитела для диагностики рака молочной железы.
Маркеров, специфичных только для рака молочной железы, в настоящее время не найдено. Следовательно, для точной постановки диагноза, необходимо использовать панель маркеров, основу которой составляют цитокератины с низкой молекулярной массой, антиген мембран эпителиальных клеток, а также рецептор эстрогена. К ним могут быть добавлены и другие маркеры, использование которых позволяет точнее охарактеризовать природу заболевания и оценить прогноз. Для распознавания доброкачественных опухолей, например, радиальных рубцов, используют антитела против гладкомышечного актина, при помощи которых выявляются миоэпителиальные клетки, присутствующие в таких опухолях.
Дифференциальная диагностика карцином проводится при помощи антител к коллагену IV типа.
Для постановки диагноза и выбора метода лечения существенное значение имеет определение рецепторов к эстрогену в клетках опухоли молочной железы. Полученные к настоящему времени антитела позволяют работать как с замороженными срезами, так и со срезами, фиксированными с использованием традиционных гистологических фиксаторов, например, формалина. Современные методы выявления атигенов, такие как ферментативная обработка срезов ДНКазой, трипсином, пепсином, тепловая обработка в микроволновой печи, позволяют получить четкие и воспроизводимые результаты.
Другим маркером опухоли молочной железы является рецептор к прогестерону, экспрессия которого инициируется эстрогеном. Этот рецептор присутствует примерно в половине опухолей, содержащих рецептор к эстрогену.
В диагностике могут быть также использованы такие маркеры, как белок pS2, рецептор эпидермального фактора роста, катепсин D .
Для прогнозирования используют незасимые маркеры, которыми являются различные онкобелки. Белок c-erB-2 характеризуется повышенным уровнем экспрессии в 30% инвазивных карцином молочной железы. Известно, что в таких случаях имеет место амплификация гена с-erB-2. Существует также корреляция между неблагоприятным прогнозом и уровнем таких белков, как маркер пролиферирующих клеток антиген Ki-67 и белок р53, экспрессия которого связана с низкой степенью дифференцировки клеток.
А также, в качестве маркеров используются: СA 15-3, CEA, Cytoceratin 8, 18, 19, CD31, EGFR, EMA, Smooth Muscle Actin.
Полный набор необходимых реагентов (специфические антитела, системы визуализации (вторые конъюгированные антитела и хромогены), растворы для разведения, буферы для промывки и демаскировки, красители) рекомендуется использовать фирменные.
Однако, допускается использование дополнительных реагентов самостоятельно приготовленных, рабочих растворов и буферов.
Антитела для изучения апоптоза и клеточной пролиферации
Апоптоз – программированная клеточная гибель в многоклеточом организме, что является нормальным физиологическим процессом, сопровождающимся деградацией ядерной ДНК, дегенерацией ядра и последующим фагоцитозом погибшей клетки. Это активный процесс, требующий энергетических затрат, стимуляции специфических ферментативных процессов, синтеза белков и , в большинстве случаев, генной транскрипции. Апоптоз играет основополагающую роль в нормальном развитии и обовлении тканей, в иммунном ответе, и в развитии таких патологий, как онкология и СПИД.
Регуляция клеточного цикла осуществляется рядом ядерных белков. Сочетание процессов стимуляции и ингибирования определяет жизненный цикл клетки и прохождение этапов роста и развития. Cтадийный переход клеточного цикла (G1, S, G2 и М) обеспечивается значительным повышением уровня соответствующих белков-циклинов. Ключевым моментом клеточного цикла является так называемая точка рестрикции в фазе G1, когда решается вопрос о завершении клеткой цикла.
В точке рестрикции происходит фосфорилирование ретинобластомного белка (pRB). Фосфорилирование осуществляется циклин-зависимой киназой (CDK) в комплексе с циклинами D и E. Повышенная активность стимулирующих белков - циклина D, циклина E и CDK4, а также инактивация различных ингибирующих белков приводит к дерегуляции клеточного цикла и повышенной клеточной пролиферации.
